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2025年，由中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所負(fù)責(zé)起草，中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)歸口的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物斑馬魚微生物與寄生蟲等級(jí)及監(jiān)測(cè)》T/CALAS 152-2025正式發(fā)布。

該標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)驗(yàn)用普通級(jí)斑馬魚和無(wú)特定病原體級(jí)斑馬魚的病原等級(jí)及監(jiān)測(cè)。同時(shí)，規(guī)定了普通級(jí)斑馬魚和無(wú)特定病原體級(jí)斑馬魚的病原等級(jí)、監(jiān)測(cè)指標(biāo)、程序、方法、結(jié)果判定和報(bào)告等。

01 標(biāo)準(zhǔn)編寫背景

斑馬魚因性成熟周期短、繁殖可控、體外受精、體外發(fā)育、胚胎透明、管理方便等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、健康科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、水產(chǎn)科學(xué)等研究領(lǐng)域，是國(guó)際上應(yīng)用范圍最廣的實(shí)驗(yàn)魚類。我國(guó)斑馬魚研究雖起步較晚但發(fā)展飛速，研究體量全球占比自2020年起連續(xù)五年全球第一，是名副其實(shí)的斑馬魚研究大國(guó)。在此期間，不僅斑馬魚實(shí)驗(yàn)室數(shù)量快速增加，同行間品系交流的數(shù)量也急劇增長(zhǎng)，帶來(lái)了管理不規(guī)范、引入多種病原和病原快速傳播等問(wèn)題。與其同時(shí)，世界范圍內(nèi)都普遍存在缺乏病原分級(jí)與規(guī)范，缺少無(wú)特定病原體(SPF)斑馬魚等問(wèn)題。我國(guó)于2020年底頒布《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)魚質(zhì)量控制》(GB/T 39649-2020)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但病原學(xué)等級(jí)及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)尚不夠完善，也未對(duì)排除特定病原級(jí)斑馬魚進(jìn)行規(guī)定。因此，開(kāi)展實(shí)驗(yàn)斑馬魚微生物與寄生蟲等級(jí)及監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)研制工作，規(guī)范實(shí)驗(yàn)用普通級(jí)斑馬魚和SPF級(jí)斑馬魚的病原等級(jí)及監(jiān)測(cè)，對(duì)于提高實(shí)驗(yàn)用斑馬魚質(zhì)量、提高科研結(jié)果的準(zhǔn)確性、確保實(shí)驗(yàn)人員安全以及應(yīng)對(duì)公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)非常重要。

02 標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容解讀

1. 術(shù)語(yǔ)和定義

普通級(jí)斑馬魚 Conventional (CV) zebrafish，不攜帶所規(guī)定的對(duì)魚和(或)人健康造成嚴(yán)重危害的病原體和動(dòng)物烈性傳染病病原體的斑馬魚。

無(wú)特定病原體級(jí)斑馬魚 Specific pathogen free (SPF) zebrafish，除普通級(jí)斑馬魚應(yīng)排除的病原體外，不攜帶對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的特定病原體的斑馬魚。

2. 斑馬魚分級(jí)病原檢測(cè)項(xiàng)目

動(dòng)物等級(jí)應(yīng)排除的病原微生物檢測(cè)要求主要檢測(cè)部位

無(wú)特定病原級(jí)普通級(jí)細(xì)菌病原致病性嗜水氣單胞菌virulent Aeromonas hydrophila (vAh)●內(nèi)臟

海分枝桿菌Mycobacterium marinum●內(nèi)臟

寄生蟲病原多子小瓜蟲Ichthyophthirius multifiliis●鰭、鰓

細(xì)菌病原鮰愛(ài)德華氏菌Edwardsiella ictaluri●腦、內(nèi)臟

柱狀黃桿菌Flavobacterium cloumnare●鰭、鰓

無(wú)乳鏈球菌Streptococcus agalactiae●腦、內(nèi)臟

海豚鏈球菌Streptococcus iniae●腦、內(nèi)臟

寄生蟲病原嗜神經(jīng)假洛姆蟲Pseudoloma neurophilia●腦

注：● 必須檢測(cè)指標(biāo)，要求陰性

3. 病原選擇及等級(jí)設(shè)定

病原選擇和等級(jí)設(shè)定主要綜合考慮以下7方面：①普通級(jí)和SPF級(jí)斑馬魚的定義;②國(guó)家現(xiàn)行法律法規(guī)的要求;③生物安全;④國(guó)內(nèi)現(xiàn)有斑馬魚實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)標(biāo)準(zhǔn);⑤國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)斑馬魚微生物和寄生蟲病的流行病學(xué)情況;⑥檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)以及檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的硬件條件;⑦適用性和前瞻性。

在國(guó)家水生生物種質(zhì)資源庫(kù)國(guó)家斑馬魚資源中心(以下簡(jiǎn)稱CZRC)現(xiàn)有的斑馬魚流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)中，國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)斑馬魚病主要表現(xiàn)有豎鱗病、爛鰓、爛尾、腹水、頭頂穿孔、出血、潰瘍腐皮、游動(dòng)異常等。在已知病原中細(xì)菌性病原最為常見(jiàn)，占比75.8%，寄生蟲類病原占比5.8%，未在實(shí)驗(yàn)室斑馬魚中發(fā)現(xiàn)病毒感染癥狀或檢出病毒性病原。

在普通級(jí)病原選擇中，主要考慮有較多報(bào)道且人魚共感染的兩種細(xì)菌病原：致病性嗜水氣單胞菌(virulent Aeromonas hydrophila (vAh))和海分枝桿菌(Mycobacterium marinum)，以及經(jīng)過(guò)正常魚房管理和動(dòng)物來(lái)源管理后不應(yīng)出現(xiàn)在斑馬魚魚房中的寄生蟲病原多子小瓜蟲(Ichthyophthirius multifiliis)。在SPF級(jí)病原選擇中，主要考慮對(duì)實(shí)驗(yàn)魚類生存危害較大和對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生嚴(yán)重干擾的四種細(xì)菌性病原和一種寄生蟲病原：鮰愛(ài)德華氏菌(Edwardsiella ictaluri)，柱狀黃桿菌(Flavobacterium cloumnare)，無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)，海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)和嗜神經(jīng)假洛姆蟲(Pseudoloma neurophilia)。

4. 檢測(cè)方法

在本標(biāo)準(zhǔn)研制過(guò)程中，對(duì)實(shí)驗(yàn)斑馬魚病原的檢測(cè)首先選擇有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法。對(duì)于未見(jiàn)于已有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的病原——鮰愛(ài)德華氏菌，或現(xiàn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中僅有形態(tài)學(xué)檢測(cè)，無(wú)分子檢測(cè)方法的——嗜神經(jīng)假洛姆蟲，本標(biāo)準(zhǔn)使用由國(guó)家斑馬魚資源中心建立，經(jīng)三家單位驗(yàn)證有效的檢測(cè)方法。

03 總結(jié)

該標(biāo)準(zhǔn)的制定可推動(dòng)不同地區(qū)、不同系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室所使用的斑馬魚質(zhì)量穩(wěn)定，增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，提高檢測(cè)數(shù)據(jù)的認(rèn)可度;從而促進(jìn)斑馬魚相關(guān)研究領(lǐng)域的發(fā)展，為研究成果的產(chǎn)業(yè)化成果轉(zhuǎn)化鋪平道路。

來(lái)源：中國(guó)斑馬魚信息中心